AVALIAÇÃO DOS ANTÍGENOS RECOMBINANTES DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS ESAT-6 E CFP10 PARA RESPOSTAS DE HIPERSENSIBILIDADE DO TIPO TARDIO EM COBAIA (CAVIA PORCELLUS)
Nome: MIRLEIDE DE ARAÚJO CÁO
Data de publicação: 25/10/2024
Banca:
Nome |
Papel |
|---|---|
| GUSTAVO MODESTO | Examinador Externo |
| LENIR CARDOSO PORFÍRIO | Examinador Externo |
| LUCIANA POLACO COVRE | Examinador Interno |
| MOISES PALACI | Presidente |
| NOEME SOUSA ROCHA | Examinador Externo |
Resumo: A tuberculose é uma doença infecciosa que ainda apresenta desafios para um controle eficaz e
continua sendo uma ameaça global à saúde, exigindo métodos diagnósticos mais rápidos e
acessíveis. Neste estudo, examinamos a resposta de proteínas recombinantes no uso do
diagnóstico da tuberculose latente, na literatura. Em seguida, selecionamos as proteínas que
mais tiveram resposta comparados ao PPD e a partir da síntese dessas proteínas da região RD1
do M. Tuberculosis, foram realizados os experimentos. Utilizamos grupos distintos,
sensibilizados com M. bovis que foram testados após 30 dias para padronização da técnica e
com M. Tuberculosis que foram testados após 30, 60 e 180 dias com PPD RT-23 em
comparação com as proteínas sintéticas ESAT-6 e CFP-10 separadamente em duas
concentrações (0,3mg/ml e 3,0mg/ml) e a das concentrações combinadas. O tempo mínimo para
formação da enduração após sensibilização é de 30 dias e o tempo médio formação da
enduração foi de 24 horas. A enduração foi medida após 24 horas e foi realizada biópsia do
local de aplicação e em seguida a imunohistoquímica para verificação da infiltração de células
como linfócitos T e macrófagos ou linfócitos B, por meio das citocinas CD3, CD68, Tbet, e
verificação da dispersão das proteínas no local por marcação do ESAT-6 e CFP-10. Os dados
foram analisados estatisticamente pelo teste de Fisher e Dunnet, respectivamente. Em paralelo
foram testadas microagulhas de diferentes construções, para posteriormente serem usadas na
distribuição dessas substâncias na pele. A média de enduração entre os antígenos e o PPD-RT23
não apresentou variabilidade significativa, e as endurações são compatíveis entre eles,
apresentando resposta positiva. Em nossos estudos verificamos que os antígenos CFP10 e
ESAT-6 provocaram reações DTH quase idênticas em cobaias infectadas com TB, e estas foram
comparáveis às respostas induzidas por PPD. Os resultados mostraram que os animais com 180
dias de sensibilização, apresentaram uma proeminente reação de hipersensibilidade cutânea
quando desafiados com as proteínas recombinantes associadas das proteínas recombinantes
CFP-10 e ESAT-6 de M. tuberculosis, induzindo uma boa resposta de hipersensibilidade
cutânea tardia em cobaias nas duas concentrações isoladamente e combinadas. Ao comparar as
categorias entre positivos e baixo positivas entre as citocinas e o PPD, entre elas, considerando
um nível de significância de 10%, não há evidências de que o desempenho do PPD seja diferente
das concentrações, para a expressão de CD3, TBET e CFP-10, ou seja eles tem a mesma ou
maior capacidade que o PPD de induzir a expressão de CD3 e Tbet no tecido, o que não ocorre
quando avaliamos a expressão de CD68, evidenciando que não há presença de células que
induzem a resposta por linfócitos do tipo B. As proteínas ESAT-6 e CFP10, nas concentrações
de ESAT-6+CFP-10 (100%) [3mg/ml] e ESAT-6(100%)+CFP-10(10%) [3mg/ml+0,3mg/ml],
induziram de forma mais eficiente a hipersensibilidade do tipo tardia nos animais, resultando
nas maiores endurações observadas. Além disso, as proteínas recombinantes fornecidas pelo
laboratório Pace Diagnostics demonstraram uma capacidade superior de indução de DTH em
comparação com as proteínas utilizadas em estudos semelhantes realizados por outros
pesquisadores.
